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包膜病毒

方法:采用Western Blot法检测不同照射剂量及照射后不同时间大鼠

  基金项目:国家自然科学基金(31300694,81673091)返回搜狐,查看更多

  原标题:【首发推荐】 基础医学:沉默Krüppel样因子5对电离辐射后小肠上皮细胞生物学功能的影响

  摘要:目的:观察电离辐射后下调Krüppel样因子5(KLF5)表达对小肠上皮细胞生长、周期分布、凋亡及DNA双链断裂的影响。方法:采用Western Blot法检测不同照射剂量及照射后不同时间大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6中KLF5的表达。设计并合成特异性针对大鼠KLF5基因的shRNA靶序列,构建到慢病毒载体中,通过感染293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。使用包装好的慢病毒感染IEC-6细胞,荧光显微镜下观察转染效率,分别采用Real time-PCR和Western Blot方法检测感染后细胞中KLF5 mRNA及蛋白的表达情况。采用CCK-8法观察电离辐射后KLF5沉默细胞的生长增殖活性,流式细胞术检测电离辐射后KLF5沉默细胞的周期分布和凋亡情况,免疫荧光染色观察电离辐射后KLF5沉默细胞中γ-H2AX foci数量。结果:电离辐射可以诱导体外培养的IEC-6细胞表达KLF5,呈现明显的时间和剂量依赖关系。KLF5 shRNA慢病毒载体构建成功,感染的IEC-6细胞中KLF5 mRNA及蛋白水平均明显降低。KLF5敲低组照射后细胞阻滞在G2/M期现象极为显著,细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率高于对照组,同一时间点细胞核中γ-H2AX foci数量明显多于对照组。结论:本研究成功构建了KLF5 shRNA慢病毒载体,建立了KLF5敲低小肠上皮细胞株,下调细胞内KLF5表达能够使细胞周期阻滞在G2/M期,明显抑制照射后细胞的增殖,促进细胞的凋亡,DNA双链断裂水平增加,修复延迟。


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