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包膜病毒

24-72小时都未见感染细胞绿色荧光表达

  查了资料说可能是包装细胞代数高了,因为逆转录病毒本身没有感染作用,取决于包装细胞,这样包装的过程中,包装出的病毒没有从包装细胞获得包膜蛋白,从而没有感染性.

  用G418筛选转染了质粒的包装细胞PT67包装细胞后,收集的逆转录病毒上清(多瓶,多个克隆上清)感染NIH3T和K562多次,24-72小时都未见感染细胞绿色荧光表达, 我最初怀疑是挑的克隆不够,但是第二轮很多克隆转至一起的上清也是同样结果.PHeonix包装出来的病毒也没有感染上NIH3T和K562, 大家有懂的帮我想想为什么啊?好着急啊!

  我用脂质体转染包装细胞PT67后,用G418进行稳定筛选, 筛选后形成的抗性克隆,在荧光倒置显微镜和普通倒置显微镜的帮助下圈出有荧光的克隆,由于时间紧张, 挑了很多个发绿色荧光的抗性克隆, 在24孔板和12孔板在含418的选择培养基中扩增,一段时间后将仍发中高强度绿色荧光的克隆转到一个瓶中,将荧光相对弱一些的克隆转导另外的瓶子中,隔两日后待瓶子细胞接近融合换用无418的10%DMEM培养24h,收集逆转录病毒上清,1000rpm离心10分钟后,取上清分装,1ml/支,于-80度保存或现用.